Bộ phát hiện kháng nguyên nhanh trong máu toàn bộ, Bộ xét nghiệm tại nhà kháng nguyên 150-250ul

Với Dụng cụ y tế IVD để làm Bộ xét nghiệm nhanh kháng thể trung hòa SARS-CoV-2

Bộ thử nghiệm huỳnh quang trung hòa kháng thể & Thử nghiệm nhanh kháng thể trung hòa

Thử nghiệm kháng thể trung hòa pseudovirus được thực hiện như đã mô tả trước đây (5).Một cách ngắn gọn, các tế bào Vero đã được gieo hạt trong các đĩa 96 giếng để tạo ra một lớp đơn lớp tại thời điểm lây nhiễm.Một lượng tiền chế của rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 tăng đột biến SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (protein huỳnh quang xanh lá cây) được tạo ra bằng cách cấy truyền tế bào HEK293T, ATCC CRL-3216] được ủ với huyết tương người được pha loãng theo thứ tự ở 37 ° C trong 1 giờ trước khi thêm vào đơn lớp tế bào Vero hợp lưu (ATCC CCL-81) trong các đĩa 96 giếng.Tế bào được ủ trong 12 đến 16 giờ ở 37 ° C trong 5% CO2.Sau đó, các tế bào được cố định trong 4% paraformaldehyde, nhuộm bằng Hoechst 1 μg / ml và được chụp ảnh bằng máy ảnh CellInsight CX5 để định lượng tổng số tế bào biểu hiện GFP.Sự lây nhiễm được bình thường hóa thành số lượng tế bào trung bình bị nhiễm rVSV-SARS-CoV-2 được ủ với huyết tương người bình thường.LOD được thiết lập ở mức <1:20 trên cơ sở các mẫu huyết tương từ một loạt các đối tượng kiểm soát không phơi sáng.Tín hiệu tiêu cực được đặt thành 1:19.IC trung tính50 (nồng độ ức chế trung bình) được tính toán bằng cách sử dụng hồi quy One-Site Fit LogIC50 trong GraphPad Prism 8.0.

Xét nghiệm trung hòa dựa trên huỳnh quang thông lượng cao

Để lấp đầy khoảng trống cho việc chẩn đoán huyết thanh COVID-19 và đánh giá vắc-xin, chúng tôi đã phát triển một xét nghiệm dựa trên huỳnh quang đo lường nhanh chóng và đáng tin cậy sự trung hòa của SARS-CoV-2 báo cáo bằng các kháng thể từ mẫu bệnh phẩm.Thử nghiệm được xây dựng trên mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 ổn định trong đó gen mNG được thiết kế tại ORF7 của bộ gen virus (Hình.1a)10.Trình tự hoàn chỉnh của mNG SARS-CoV-2 được mô tả trong Hình bổ sung.1.Nhân vật1bmô tả sơ đồ của xét nghiệm trung hòa phóng viên ở định dạng 96 giếng.Quy trình khảo nghiệm được trình bày chi tiết trong Phương pháp bổ sung.Một cách ngắn gọn, huyết thanh của bệnh nhân được pha loãng theo phương pháp huyết thanh và ủ với virus phóng viên.Sau khi ủ ở 37 ° C trong 1 giờ, các tế bào Vero CC-81 (được gieo sẵn trong đĩa 96 giếng) đã bị nhiễm hỗn hợp vi rút / huyết thanh với mức độ nhiễm trùng đa dạng (MOI) là 0,5.Vào lúc 16 giờ sau khi lây nhiễm, các tế bào dương tính với mNG được định lượng bằng thiết bị đọc hình ảnh hàm lượng cao (Hình.1b).Cần lưu ý rằng các tế bào Vero CC-81, không phải tế bào Vero E6, được chọn cho xét nghiệm mNG để cho phép định lượng chính xác các tế bào huỳnh quang.Sáu mươi mẫu huyết thanh COVID-19 từ những bệnh nhân được xác nhận bằng RT-PCR và 60 mẫu huyết thanh không có COVID-19 (được lưu trữ trước khi COVID-19 xuất hiện) được phân tích bằng cách sử dụng virus báo cáo.Đối với một số bệnh phẩm dương tính với COVID-19, các ngày thu thập mẫu xét nghiệm RT-PCR dương tính với virus đã có sẵn và được chỉ ra trong BảngBảng 1.1.Sau khi bị nhiễm virus, các tế bào chuyển sang màu xanh lục khi không có huyết thanh (Hình.1c, bảng điều khiển phía dưới);ngược lại, ủ virus báo cáo với COVID-19 huyết thanh bệnh nhân làm giảm số lượng tế bào huỳnh quang (bảng trên cùng).Đường cong đáp ứng liều lượng thu được giữa số lượng tế bào huỳnh quang và thời gian pha loãng huyết thanh (Hình.1ngày và Hình bổ sung. 2), cho phép xác định độ pha loãng đã trung hòa 50% tế bào huỳnh quang (NT50).Xét nghiệm phóng viên chẩn đoán nhanh chóng 120 mẫu trong vòng 24 giờ: tất cả 60 huyết thanh COVID-19 (mẫu 1–60) đều cho thấy NT dương tính50 trong số 35 đến 5711, và tất cả 60 huyết thanh không phải COVID-19 (mẫu 61–120) cho thấy NT âm tính50 của <20 (Bảng 1).

Tham số: